孔雀石綠檢測試劑盒標準液:
標準品溶液(0ppb,0.05ppb,0.1ppb,0.2ppb,0.4ppb,0.8ppb)
取6個1.5ml離心管,把標準品濃縮液用標準品稀釋液稀釋10倍(如:450ul標準品稀釋液加入50ul10×標準品濃縮液)
6.1編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2活化:加120ul活化劑工作液(配液B)到微孔中,室溫下反應10min,倒掉拍干,加洗滌工作液(配液A)250ul/孔,洗滌5次,每次間隔30s,棄去孔中液體,在吸水紙上拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的吸頭戳破)。
6.3加樣反應:加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光反應30分鐘。
6.4洗滌:將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液工作液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,后用吸水紙拍干。
6.5加酶反應:加酶標記物100µl/孔,37℃避光反應30分鐘。
6.6洗滌:同上
6.7顯色:加底物液A50µl/孔,再加底物液B50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光顯色15分鐘。
6.8終止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應。
6.9測吸光值:用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應在終止反應后10分鐘內(nèi)完成。